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液相色譜儀儀器校準(zhǔn)怎么做？具體校準(zhǔn)方法是什么？

2022-12-14 12:00

液相色譜法概述
液相色譜儀是由輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等部分組成的分析儀器。液相色譜儀是根據(jù)樣品之中各組分在色譜柱中的固定相和流動(dòng)相間的分布或吸附特性的差異，流動(dòng)相將樣品帶入色譜柱進(jìn)行分離。由檢測(cè)器檢測(cè)，并由數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄。色譜圖，根據(jù)各組分的保留時(shí)間和響應(yīng)值（峰面積或峰高）進(jìn)行定性和定量分析。
測(cè)量儀器校準(zhǔn)
（1）環(huán)境條件
室溫為（15～30）℃，儀器校準(zhǔn)過(guò)程之中溫度變化不超過(guò)3℃（對(duì)于差示折射率檢測(cè)器，室溫變化不超過(guò)2℃），室內(nèi)相對(duì)濕度：（20～85）%。房間內(nèi)不得存放易燃、易爆、強(qiáng)腐蝕性物品。無(wú)機(jī)械振動(dòng)和電磁干擾，通風(fēng)良好。
（2）儀器校準(zhǔn)采用標(biāo)準(zhǔn)材料
a.萘-甲醇溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：定值為1.00×10-4g/mL，擴(kuò)展不確定度小于4%，K=2
b.萘-甲醇溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：檢定值為1.00×10-7g/mL，擴(kuò)展不確定度小于4%，K=2
c.膽固醇甲醇溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：標(biāo)準(zhǔn)值為200μg/mL，擴(kuò)展不確定度小于2.0%，K=2。
d.甲醇之中膽固醇溶液標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)值為5.0μg/mL，擴(kuò)展不確定度小于5.0%，K=2。
e.膽固醇純度標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)值為99.7%，擴(kuò)展不確定度小于0.1%，K=2。
（3）輸液系統(tǒng)
a.泵的耐壓性：將儀器各部分連接好，以甲醇（或純水）為流動(dòng)相，流速為0.2 mL/min。按說(shuō)明書(shū)啟動(dòng)儀器，保持壓力穩(wěn)定10分鐘，用濾紙檢查各管道接口處是否有濕痕。取下色譜柱，堵塞泵出口端（壓力傳感器上方），使壓力達(dá)到最大允許值的90%，保持5分鐘，應(yīng)無(wú)泄漏。
b.泵流量設(shè)定誤差及流量穩(wěn)定性：按要求設(shè)定流速，啟動(dòng)儀器，待壓力穩(wěn)定之后，用事先稱量過(guò)的清潔容量瓶在流動(dòng)相出口處收集流動(dòng)相，用秒表計(jì)時(shí)。收集規(guī)定時(shí)間之內(nèi)流出的流動(dòng)相，在分析天平之上稱重，計(jì)算所測(cè)流速，重復(fù)儀器校準(zhǔn)3次。
c.梯度誤差:用梯度控制裝置設(shè)置梯度洗脫程序，A溶劑為純水，B溶劑為含0.1%丙酮的水溶液。將輸液連接至檢測(cè)器（未連接色譜柱），開(kāi)機(jī)后用溶劑A沖洗系統(tǒng)，待基線穩(wěn)定之后啟動(dòng)梯度程序，分5步繪制溶劑B從0%到*的梯度變化曲線。計(jì)算B溶劑變化引起的每一步對(duì)應(yīng)的響應(yīng)信號(hào)值的變化值，重復(fù)儀器校準(zhǔn)兩次，計(jì)算結(jié)果。
(4) 柱箱溫度設(shè)定點(diǎn)誤差和穩(wěn)定性校正
a.修復(fù)將數(shù)字溫度計(jì)探頭置于色譜柱恒溫器之中與色譜柱相同的位置，并選擇35℃和45（也可根據(jù)工作溫度設(shè)定）進(jìn)行儀器校準(zhǔn)。
b.按儀器說(shuō)明書(shū)操作，接通電源，升溫。溫度穩(wěn)定之后，記錄溫度計(jì)的讀數(shù)，并開(kāi)始計(jì)時(shí)。后，每10分鐘記錄一次讀數(shù)，共7次，計(jì)算平均值。
c. 平均值與設(shè)定值間的差值為柱溫設(shè)定值的誤差，7個(gè)讀數(shù)中的極大值與最小值之差是柱溫穩(wěn)定性。
（5）探測(cè)器標(biāo)定（以紫外可見(jiàn)光探測(cè)器和二極管陣列探測(cè)器為例）。
（6）定性和定量重復(fù)性儀器校準(zhǔn)
將儀器各部分聯(lián)接好，選用C18色譜柱，用*甲醇為流動(dòng)相，流量為1.0mL/min，根據(jù)儀器配置的檢測(cè)器，選擇相應(yīng)的測(cè)量參數(shù)如紫外可見(jiàn)光檢測(cè)器和二極管陣列檢測(cè)器波長(zhǎng)設(shè)定為254 nm，靈敏度選擇適中，基線穩(wěn)定之后由進(jìn)樣系統(tǒng)注入一定體積的1.0×10-4 g/mL萘-甲醇溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，其他檢測(cè)器選擇相應(yīng)的參數(shù)。連續(xù)測(cè)定6次，記錄色譜峰的保留時(shí)間和峰面積，最終計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差。